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摘要：为探究华中地区临床发病猪群猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV-2）感染状况及特点，2018—2019年，从湖北省的武汉、随州、咸宁、荆州，湖南省的常德、衡阳、汨罗、株洲等8个地市的40个规模化猪场，采集临床发病猪群血样1 550份，利用本实验室建立的巢式PCR诊断技术进行PCV-2病原学检测，并采用SPSS 24.0卡方检验，对结果进行不同地区、不同养殖阶段、不同季节统计分析，同时追踪与其他繁殖障碍性疾病病原的混合感染情况。结果显示：湖南、湖北两省8个地区发病猪群的PCV-2平均检出率为31.68%（491/1550），所有检测地区均有不同程度的PCV-2感染，病原检出率在8.79%~49.01%之间波动，差异显著（P＜0.05）；不同养殖阶段发病猪群均有PCV-2阳性检出，检出率在12.17%~60.84%之间波动，差异显著（P＜0.05），其中育肥猪和保育猪检出率较高，而哺乳仔猪、经产母猪和后备猪偏低；PCV-2一年四季均有检出，检出率在5.98%~49.81%之间，但有一定的季节性，夏冬季节检出率偏高，而春秋季节偏低（5.98%），差异显著（P＜0.05）；PCV-2和其他繁殖障碍性疾病病原的多重感染较为常见，其中以PCV-2+PRRSV双重感染和PCV-2+PRRSV+PRV三重感染为主，而四重以上感染较为少见。结果表明，湖南、湖北两省的PCV-2病原分布较为广泛，是导致该区域猪群发病的重要病因，但其流行有一定的地区、猪群和季节差异。建议加强高流行地区、高发季节、重点猪群的免疫、检测和生物安全管理，逐步控制和净化PCV-2。本研究初步了解了华中地区PCV-2的流行特点，为其流行控制和净化制定提供了参考。
猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）属于圆环病毒科，是迄今为止脊椎动物中最小的DNA病毒之一。PCV有多个血清型，如PCV-1、PCV-2及PCV-3等。PCV-1是猪肾细胞系的污染物，对猪无致病性，但能产生血清抗体。相比之下，PCV-2具有致病性，以侵害动物体内的免疫系统为主，是公认的世界上危害最严重的猪病病原之一，是断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）和皮炎与肾病综合征（PNDS）的主要病因。PCV-2可感染各阶段猪群：5~16周龄阶段，易导致PMWS；育肥后期（16~22周龄），则更多表现呼吸疾病综合征。最近发现的PCV 3与猪皮炎与肾病综合征以及生殖衰竭、心脏和多系统炎症有关，但其致病机制尚不清楚。
为了解华中地区临床发病猪群PCV-2感染状况及特点，2018—2019年，从湖南省、湖北省部分地区规模化猪场，采集1550份临床发病猪样本，利用本实验室建立的巢式PCR方法进行PCV2病原学检测，并分析不同地区、不同养殖阶段、不同季节及与其他疾病混合感染情况，以期为今后PCV-2净化提供依据和数据支撑。
材料与方法
样品来源
2018年3月—2019年2月，从湖北省的武汉、随州、咸宁、荆州，湖南省的常德、衡阳、汨罗、株洲等8个地市的40个规模化猪场（存栏量＞500头），采集出现PMWS、PDNS、繁殖障碍、传染性先天性震颤（CT）、腹泻等临床症状的发病猪群，每月1次采样（前腔静脉采血），共计采集1550份血清样品，-20℃保存待检（表1）。被检猪场均按各自制定的PCV-2免疫程序进行免疫。
样品处理及病毒核酸提取
将采集的全血1500r/min 离心30min，取上清；按照Axygen体液提取试剂盒说明书，对上清进行病毒核酸提取；用Nanodrop 1000检测所提取DNA的浓度和纯度，然后将DNA于-20℃保存备用。
病原学检测
采用本实验室建立的巢式PCR检测方法，对样品进行病原学检测。引物序列如表2所示。
数据统计与分析
对不同地区、不同养殖阶段、不同季节及混合感染的检测结果，采用SPSS 24.0卡方检验进行差异性分析，P＞0.05为差异不显著，P＜0.05为差异显著。
结果与分析
不同地区
不同地区检测结果（图1）显示：湖南、湖北两省8个地市的PCV-2检出率在8.79%~49.01%之间波动，平均检出率为31.68%（491/1550），其中常德市最高（49.01%），其次是武汉、咸宁、衡阳、株洲、荆州、汨罗，随州市最低（8.79%）。该结果表明，这2个省区的规模化猪场均存在不同程度的感染，且不同地市间PCV-2检出率差异显著（P＜0.05）。
不同养殖阶段
不同养殖阶段检测结果（图2）显示：各养殖阶段猪群均有PCV-2阳性检出，检出率在12.17%~60.84%之间，其中育肥猪（60.84%）和保育猪（58.29%）检出率较高，而哺乳仔猪（16.87%）、经产母猪（14.04%）和后备猪（12.17%）偏低。不同养殖阶段猪群的PCV2检出率差异显著（P＜0.05）。
不同季节
不同季节检测结果（图3）显示：PCV-2一年四季均有流行，但具有一定的季节性，其中夏季（6—8月）检出率最高（49.81%），而春季（3—5月）最低（5.98%）。不同季节PCV-2检出率差异显著（P＜0.05）。
混合感染
将送检的1550份临床样品同时进行PCV-2、PCV-3、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）病原学检测。结果（表3）显示：除PCV-3未检出外，其他4种病原均存在不同程度的单一感染，其中PRRSV单一感染率（32.39%）最高，其次是PRV（19.81%），PPV较低（13.55%），而PCV-2单一感染最低（2.45%）；双重感染（49.74%，771/1550）最为常见，以PCV-2+PRRSV为主，其次是PCV-2+PRV，PCV-2+PPV最低；三重感染率（16.58%）较低，以PCV-2+PRRSV+PRV为主，其次是PCV-2+PRRSV+PPV，PCV-2+PRV+PPV最低。四重感染（0.06%，1/1550）极少。单一感染、双重感染、三重感染的检出率差异显著（P＜0.05）。
讨论
随着规模猪场数量的逐渐增多，生猪交易愈加频繁，PCV-2感染率也逐年提高，给我国养猪业造成极大危害。本研究对2018—2019年华中地区湖南、湖北两省8个地市规模场送检的发病猪血清样品进行PCV-2病原学检测，发现PCV-2检出率在8.79%~49.01%之间，表明PCV-2在两省规模化猪场普遍流行，平均检出率为31.68%，表明流行较为严重。韦显凯等2016年对广西部分地区猪群5种疫病流行情况监测发现，PCV-2检出率为39.12%；蒋新华等对2013—2017年采集自江西省10个地区的1082份疑似PCV-2感染猪病料组织进行病原学检测发现，610份为PCV-2阳性，总检出率为56.4%。上述结果均表明，PCV-2在我国流行广泛且较为严重，对我国养猪业形成较大危害。不同地区间的差异，通常与猪场的饲养密度、环境控制及管理水平有关，也可能受地理环境及自然气候等因素影响。湖南省养猪业较密集，猪只调运较频繁，PCV-2通过拉猪车、污染的工具、粪便等传播的风险较高，因此应严格执行生物安全措施，实行封闭性管理，发现可疑病猪应及时隔离，并加强外进货物、车辆、返厂人员的消毒，防止病原传入。感染率低的地区应对发病猪进行有效隔离，断绝与其他健康猪只的接触，尽可能控制PCV-2的横向传播，同时严格把控引种猪只来源，坚持自繁自养。
不同养殖阶段猪群检测结果显示，PCV-2可感染各养殖阶段猪群。育肥猪（60.84%）和保育猪（58.29%）感染较为严重，而哺乳仔猪（16.87%）、经产母猪（14.04%）、后备猪（12.17%）较轻，这与刘冰许等对2015年新乡市PCV-2病原学检测的结果相近。哺乳仔猪通过摄取初乳获得母源抗体保护，从而免受PCV-2侵害。也有研究表明，仔猪在母源抗体降至临界值时，如果疫苗免疫不及时，往往在仔猪断奶后转至保育时出现PMWS症状，这也解释了保育猪群感染的主要原因。而育肥猪的饲养密度较大，猪舍环境、管理水平都有所欠缺，猪群通过口-鼻-粪或者污染工具在猪群中水平传播，因而感染概率较高。因此，仔猪应在3~6周龄接种PCV-2疫苗；育肥、保育猪养殖密度较大，可适当增设通风口、排气扇，对转栋、转栏的猪舍（环境棉拭子）、猪只（鼻/肛拭子）的PCV-2病原学抽样检测，做到环境、猪只双阴性方可转群；对母猪应采取PCV-2疫苗普免（3~4次/年）。
检测发现，该地区PCV-2感染具有一定季节性，其中夏季和冬季是感染高峰期，与段群棚等调查的结果基本一致。分析原因，华中地区夏热冬寒，湿度高，冷热应激可引起猪群不适，导致机体抵抗力下降，而PCV-2可侵害猪免疫系统，抑制体内免疫应答，影响PCV-2疫苗的效力，从而导致感染率升高。因此，夏、冬季应严格控制猪舍温度，避免因冷热应激致使猪群的免疫力降低，且PCV-2免疫程序也需参考当地气温变化进行调整。同时，也需加强夏、冬季的综合防疫工作。
本检测结果显示，PRRSV单一感染率较高，与PCV-2的双重感染和三重感染较为多见，与段群鹏的观点一致。这是因为PCV-2主要侵害猪的免疫系统，导致机体免疫力下降，从而引起多种病原协同感染。因此，规模化猪场应加强猪群的PCV-2病原学监测，完善生物安全体系，在做好PCV-2流行控制的同时，加强对其他疾病的防控和治理。
结论
综上所述，湖南、湖北两省PCV-2分布较为广泛，一年四季皆有流行，可感染所有养殖阶段猪群，与其他病原的混合感染严重，但其流行有一定的地市、猪群和季节差异，其中保育猪群感染最严重，夏、冬季节高发。建议加强高流行地区、重点猪群、高发季节的免疫、检测以及生物安全管理，逐步控制和净化PCV-2。
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