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摘 要：
面对全球动物疫病防控形势, 禽流感、新城疫毒株的变异与毒力增强, 笔者于2009年2～12月份, 通过对平谷区某蛋鸡场的H5N1 (Re4、Re5) 、ND跟踪监测母源抗体消长和免疫效果情况, 摸索出适宜平谷地区蛋鸡高致病性禽流感和新城疫的科学免疫程序。根据适宜的免疫程序, 2010～2011年共跟踪监测、指导全区5212个场次6080个批次蛋鸡的禽流感、新城疫适时免疫、监测, 其中对361个批次1390900只蛋鸡提出禽流感“立即加强免疫”的指导意见, 对120个批次342000只蛋鸡提出新城疫“立即加强免疫”的指导意见, 避免了免疫失败造成的损失。2010、2011年全区蛋鸡H5N1 (Re4、Re5) 、ND免疫抗体的总体保护率H5N1-Re5株分别为89.01%、88.24%, H5N1-Re4株分别为91.45%、92.88%, 新城疫分别为92.64%、94.26%, 比农业部颁布的70%合格率标准高出18～25个百分点, 使全区蛋鸡免疫抗体始终保持在较高保护水平, 笔者在平谷区蛋鸡重大疫病防控监测上尽了一个专业技术人员的职责, 为平谷区蛋鸡产业的健康稳步发展做出了贡献。
关键词：
高致病性禽流感; 新城疫; 免疫效果; 监测;
高致病性禽流感 (Highly patyogenic Avian Influenza, HPAL) 是由A型禽流感病毒的某些高致病力亚型引起的一种急性、高度致死性传染病, 是世界动物卫生组织 (OIE) 规定的A类传染病, 我国列为一类动物疫病。它的流行给世界养禽业造成极大危害和巨大经济损失, 同时也严重的影响着人类公共卫生的健康。高致病性毒株如H5N1亚型感染时, 易感禽发病率死亡率均可达100%, 并能直接感染人类。
新城疫 (newcastle disease, ND) 同样被OIE列为A类传染病, 我国列为一类动物疫病, 也是危害养禽业的一种主要传染病。它是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以鸡最易感, 病鸡是本病的主要传染源, 病毒同样可经消化道、呼吸道、眼结膜、受伤的皮肤及泄殖腔粘膜侵入机体, 发病率和死亡率均很高。
预防接种疫苗是防控禽流感、新城疫的重要措施, 免疫抗体水平监测是评估家禽免疫效果和风险的重要手段[1]。对于高致病性禽流感和新城疫的防控, 在实际养殖生产中, 主要按照农业部制定的年度国家动物疫病强制免疫计划进行疫苗免疫, 同时运用实验室血清学抗体检测方法, 及时掌握鸡群的禽流感、新城疫抗体动态水平, 这对于提高疫病监控能力, 指导养殖生产, 提供合理免疫程序至关重要[2]。
平谷区蛋鸡存栏量居全市之首, 目前存栏蛋鸡270万只, 规模养殖占有较大比重, 北京平谷四位一体300万只蛋鸡现代化养殖项目和峪口禽业蛋种鸡基地建成后, 全区蛋鸡存栏将突破700万只。自2005年以来, 平谷区全面开展科学规范程序化免疫、跟踪监测和科学评估全区蛋鸡的高致病性禽流感和新城疫免疫效果, 为全区蛋鸡产业健康稳步发展奠定了坚实的基础。
笔者2009年2月份开始对3200只商品代海兰褐蛋鸡高致病性禽流感和新城疫母源抗体消长规律和跟踪监测免疫效果, 探讨出更加适合本区域蛋鸡的免疫程序, 并根据适宜的免疫程序对全区蛋鸡跟踪指导适时免疫和监测。本文主要针对2010~2011年平谷区商品蛋鸡高致病性禽流感、新城疫免疫抗体监测数据及指导意见进行统计分析, 为本区商品蛋鸡适时免疫、监测提供科学依据。
1 材料
1.1 试验动物及饲料
选定平谷区某养殖场同一批次1日龄海兰褐蛋鸡3200只, 购于北京市华都峪口禽业有限公司;强化幼雏料 (适合1~10d, 海兰专用) 、雏鸡开食料 (适合1~6周, 海兰专用) 、育成蛋鸡全价饲料, 由北京华都峪口禽业有限公司饲料营销中心提供。
1.2 试验用疫苗
禽流感H5N1 (Re4-Re5) 灭活疫苗, 生产厂家为哈尔滨兽医研究所;新城疫弱毒疫苗为La Sota-Clone30株, 北京华都兽医生物药品厂提供;新城疫灭活疫苗, 生产厂家为山东齐鲁动物保健品有限公司。
1.3 抗体检测诊断试剂
新城疫稳定抗原, 由北京市兽医诊断所提供;禽流感H5N1 (Re4-Re5) 抗原和阳性血清, 生产厂家为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;1%非免疫鸡红细胞, 区疫控中心实验室制备 (采集2~3只健康非免疫公鸡的血液, 与等体积的阿氏液混合, 用p H7.2、0.01mol/L PBS液洗涤3次, 然后用PBS配成1%的红细胞悬液, 4℃保存备用) 。
1.4 试验用仪器
5~50μl定量移液器、离心机、一次性注射器、采血管、96孔90μl微孔反应板, 单道、八道和十二道微量移液器。
2 方法
2.1 实验动物分组
选定平谷区某养殖场同一批次1日龄海兰褐蛋鸡3200只, 分二组, 试验I组200只用于母源抗体检测试验, 试验Ⅱ组3000只根据试验得出的免疫程序二免后21d采血跟踪监测抗体水平。
2.2 试验动物采血方法
各组实验动物均采用心脏或翅下静脉采血。
2.3 抗体滴度 (log2) 检测方法
采用血凝 (HA) 与血凝抑制试验 (HI) (《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国标准GB/T 18936-2003、《新城疫诊断技术》中华人民共和国标准GB/T16550-2008) 。
2.4 试验I组海兰褐蛋鸡高致病性禽流感、新城疫母源抗体消长规律试验I组200只随机选出的1日龄海兰褐蛋鸡随机抽取20只, 分别于1、7、14、21日龄采血, 分离血清, 应用HI试验方法检测致病性禽流感、新城疫母源抗体消长情况。新城疫首免时间确定根据公式[3]:首免日龄=4.5× (1日龄血凝抑制抗体对数值-4) +5;高致病性禽流感根据7日龄监测结果确定首免时间。
2.5 试验Ⅱ组二免后免疫抗体适时跟踪监测
对试验Ⅱ组根据试验I组确定首免, 高致病性禽流感30日龄进行二免, 新城疫首免后用灭活疫苗肌注, 二免后21d采血跟踪监测高致病性禽流感、新城疫免疫效果。免疫成功后, 根据抗体均值、抗体离散度设计每隔30~60d采血监测一次抗体, 确定下一次监测或加强免疫时间。
2.6 平谷区对高致病性禽流感、新城疫免疫抗体的适时跟踪监测结果分析重点对2010~2011年全区蛋鸡高致病性禽流感、新城疫免疫抗体跟踪监测, 数据统计分析鸡群程序化免疫抗体保护水平和免疫失败后“立即加强免疫”和“减少不必要免疫”的批次情况。
3 结果
3.1 试验I组海兰褐蛋鸡高致病性禽流感、新城疫母源抗体消长规律、首免时间的确定200只随机选出的1日龄海兰褐蛋鸡随机抽取20只采血检测禽流感、新城疫母源抗体滴度, 分别在1、7、14、21日龄采血检测, 检测抗体均值见表1。根据公式:新城疫首免日龄=4.5× (1日龄血凝抑制抗体对数值-4) +5及其14日龄抗体均值4.45, 确定新城疫首免时间为15d, 禽流感7日龄H5N1-Re4、H5N1-Re5抗体均值 (㏒2) 分别为4.65和4.45, 确定禽流感首免日龄为10d。ND、H5N1-Re4、H5N1-Re5母抗滴度 (log2) 均值及消长规律如图1示。
H5N1-Re4珠、H5N1-Re5珠母源抗体水平 (log2)3.2 试验Ⅱ组二免后免疫抗体适时跟踪监测根据试验I组, 禽流感H5N1 (Re4-Re5) 灭活疫苗10d注射, 新城疫15d弱毒疫苗La Sota-Clone30株滴鼻点眼, 30日龄进行禽流感和新城疫 (灭活苗注射) 加强免疫, 第二次加强免疫后21d (即51日龄) 进行采血监测免疫效果, H5N1-Re4、H5N1-Re5和ND抗体均值 (㏒2) 分别为6.4、6.2和6.9, 三种疫苗免疫成功。为了不影响鸡群正常产蛋, 需在产蛋前 (120日龄左右) 鸡群抗体水平合格的情况下进行三免;150、210、270日龄监测抗体均值均较高, 不需免疫;300日龄时禽流感抗体保护值接近临界水平需进行第四次免疫;330、390和450日龄监测抗体均值表示鸡群直至淘汰均可处于免疫保护状态。具体监测数据见图2。
3.3 科学评估高致病性禽流感、
新城疫免疫效果, 提出科学的指导意见两年来, 笔者根据监测鸡群的日龄、高致病性禽流感和新城疫免疫次数等具体免疫情况及其抗体均值、抗体离散度的监测数据, 结合2009年对3200只商品代海兰褐蛋鸡高致病性禽流感和新城疫母源抗体消长规律和跟踪监测免疫效果的试验数据, 对6080批次鸡群提出科学指导适时免疫、监测的意见, 其中对5719批次鸡群提出下一次采血监测时间意见、对361批次鸡群提出“立即加强免疫”意见, 避免了免疫失败造成的损失。2010、2011年全区蛋鸡H5N1 (Re4、Re5) 、ND免疫抗体的总体平均保护率H5N1-Re5株分别为89.01%、88.24%, H5N1-Re4株分别为91.45%、92.88%, 新城疫分别为92.64%、94.26%, 比农业部颁布的70%合格率标准高出18~25个百分点, 使全区蛋鸡免疫抗体始终保持在较高保护水平。
3.3.1 平谷区2010年蛋鸡高致病性禽流感、新城疫免疫抗体保护水平平谷区2010年在蛋鸡养殖中共跟踪监测、指导全区1712个场次2055个批次蛋鸡的禽流感、新城疫适时免疫、监测。跟踪监测高致病性禽流感免疫抗体, 共计检测免疫血清17181份, 其中H5N1-Re5株抗体达到保护水平 (≥4log2) 的有15293份, 抗体保护率为89.01%, H5N1-Re4株抗体达到保护水平 (≥4log2) 的有15712份, 抗体保护率为91.45%。跟踪监测新城疫免疫抗体, 共计检测免疫血清16986份, 其中ND抗体达到保护水平 (≥5log2) 的有15736份, 抗体保护率为92.64%;ND、H5N1-Re4株、H5N1-Re5株各环节监测情况如表1。
3.3.2 平谷区2011年蛋鸡高致病性禽流感、新城疫免疫抗体保护水平平谷区2011年在蛋鸡养殖中共跟踪监测、指导全区3500个场次4025个批次蛋鸡的高致病性禽流感、新城疫适时免疫、监测。跟踪监测高致病性禽流感免疫抗体, 共计检测免疫血清24761份, 其中H5N1-Re5株抗体达到保护水平 (≥4log2) 的有21850份, 抗体保护率为88.24%, H5N1-Re4株抗体达到保护水平 (≥4log2) 的有22997份, 抗体保护率为92.88%。跟踪监测新城疫免疫抗体, 共计检测免疫血清24801份, 其中ND抗体达到保护水平 (≥5log2) 的有23377份, 抗体保护率为94.26%;ND、H5N1-Re4、H5N1-Re5株各环节监测情况如表2。
3.3.3 科学评估指导481批次免疫失败鸡群“立即免疫”
2010年共跟踪监测、指导全区1712个场次2055个批次蛋鸡的禽流感、新城疫适时免疫、监测, 其中对159个批次486800只蛋鸡提出禽流感“立即加强免疫”的指导意见, 对85个批次212700只蛋鸡提出新城疫“立即加强免疫”的指导意见, 避免了免疫失败造成的损失。
2011年共跟踪监测、指导全区3500个场次4025个批次蛋鸡的高致病性禽流感、新城疫适时免疫、监测, 其中对202个批次904100只蛋鸡提出高致病性禽流感“立即加强免疫”的指导意见, 对35个批次129300只蛋鸡提出新城疫“立即加强免疫”的指导意见, 避免了免疫失败造成的损失。如表3示。
3.3.4 科学跟踪监测和评估免疫效果大大减少鸡群免疫1242次平谷区规定商品蛋鸡开产前要完成高致病性禽流感、新城疫3次免疫, 2010年、2011年2年共跟踪监测6080批次鸡群, 对开产后到500d淘汰免疫成功的3188批次鸡群, 进行3、4次免疫的进行统计分析, 具体情况见表4。
按农业部程序蛋鸡开产后每隔4月免疫1次, 500日龄蛋鸡需要免疫6次, 从表4可以看出, 从421~500日龄段中236批次鸡群仅免疫3次, 一批鸡群减少了3次免疫, 236批次鸡群共减少708次免疫;从421~500日龄段中267批次鸡群免疫4次, 一批鸡群减少了2次免疫, 267批次鸡群共减少534次免疫;共计减少鸡群免疫次数为1242次。
4 讨论与小结
4.1 检测蛋鸡高致病性禽流感、新城疫母源抗体消长规律, 确定最佳首免时机免疫预防是控制禽流感、新城疫发生的有效手段, 首次免疫最佳时间的确定则是做好免疫工作的一个关键。
母源抗体既能在短时间内对雏禽抵御病毒感染有一定的保护作用, 又能干扰禽体对疫苗的免疫应答而降低免疫效果[4]。通过试验I, 禽流感首免时间为10日龄、新城疫首免时间为15日龄, 此时免疫效果最佳。从试验I得出, 因每批雏鸡母源抗体水平受多种因素影响不尽相同, 在具备监测条件的情况下, 提倡每个养鸡场主动采血监测母源抗体水平, 根据母源抗体水平来确定最佳首免时机, 以降低因母源抗体水平低下造成疫病发生的风险或母源抗体水平过高干扰机体对疫苗的免疫应答而降低免疫效果。
4.2 跟踪监测高致病性禽流感、新城疫二免后免疫抗体衰减规律, 为评估免疫效果提供科学依据根据试验I组, 确定禽流感H5N1 (Re4-Re5) 灭活疫苗10d注射, 新城疫15d弱毒疫苗La Sota-Clone30株滴鼻点眼, 间隔2~3周加强免疫。二免后21d进行采血监测免疫效果, 如果免疫失败立即加强免疫, 免疫成功为了不影响鸡群正常产蛋, 需在产蛋前 (120日龄左右) 对鸡群进行免疫, 免疫后21d进行采血监测免疫效果。鸡群开产后至淘汰, 再跟踪监测免疫效果。从试验Ⅱ和2年来6080批次监测数据得出, 在鸡群正常且监测样品合格率≥70%情况下, 建议禽流感、新城疫抗体均值分别在4~5log2、5~6log2之间的需过1个月再采血监测, 在5~6log2、6~7log2之间的需过2个月再采血监测;在6~7log2、7~8log2之间的需过3个月再采血监测, 7~8log2、8~9log2之间的需过4个月再采血监测, 8~9log2、9~10log2之间的也不能长于4个月采血监测一次, 以免因间隔4个月鸡群抗体的变化造成的风险。
4.3 科学评估蛋鸡高致病性禽流感、新城疫免疫效果, 确保全区鸡群保持较高免疫水平对高致病性禽流感和新城疫免疫合格的场户也不是按部就班地按照农业部推荐程序每隔4月加强免疫一次, 鸡群饲养500d一般要进行6次免疫。而试验数据显示两年来通过跟踪监测和免疫效果评估的6080个批次中, 从3188批次免疫3或4次分析, 其中421~500日龄段中236批次鸡群仅免疫3次, 一批鸡群减少了3次免疫, 236批次鸡群共减少708次免疫;从421~500日龄段中267批次鸡群免疫4次, 一批鸡群减少了2次免疫, 267批次鸡群共减少534次免疫。余下的2892批次鸡群, 其中2411批次鸡群需免疫5~7次, 481批次当时免疫失败应“立即加强免疫”。试验结果表明在鸡群正常的情况下, 免疫成功鸡群可以减少2~3次免疫, 减少应激反应, 避免影响鸡群产蛋, 提高了养鸡场经济效益。
4.4 程序化免疫结合跟踪监测免疫效果是有效控制动物重大疫病的重要手段按程序免疫结合跟踪监测免疫效果, 既考虑到免疫程序的制定也考虑到了家禽个体的免疫应答差异, 适时免疫, 避免盲目免疫造成免疫应激及免疫麻痹。本区禽流感、新城疫疫病防控采用程序免疫和跟踪监测相结合的方法, 对免疫失败鸡群“立即加强免疫”, 确保了鸡群禽流感、新城疫的免疫抗体始终保持在保护状态, 有效地防控了两大疫病的发生。
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