摘要:为了解广西玉林市2020年规模禽场禽流感病毒感染状况,采用荧光RT-PCR方法,对广西玉林市7个县(市、区)42个规模化禽场采集的1 260份禽喉/泄殖腔棉拭子样品进行了通用型禽流感病毒核酸检测(荧光PCR),并对检测为阳性的样本进行H5、H7亚型(双重荧光PCR)和H9亚型(荧光PCR)分型鉴定。结果显示:在42个规模化禽场中,未检出H5和H7亚型高致病性禽流感病毒阳性样品;在2个鸡场中检出18份H9亚型低致病性禽流感病毒阳性样品,在2个鸡场和4个鸭场中检出115份其他亚型低致病性禽流感病毒阳性样品。结果表明:在高致病性禽流感(H5+H7)三价灭活疫苗强制免疫政策下,广西玉林市规模化禽场的高致病性禽流感病毒感染风险较小,但仍须加强禽流感的免疫、监测,做好综合防控,以降低禽流感病毒由低致病性重组变异为高致病性的风险。本检测为指导广西玉林市禽流感防控提供了依据。
禽流感(avian influenza,AI)是由A型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的一种急性和高度接触性传染病,几乎所有的野生和家养禽类都可感染。基于病毒表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)蛋白抗原性不同,AIV可分为16个H亚型(H1—H16)和9个N亚型(N1—N9)。另外,根据AIV致病性和毒力不同,AI又可分为高致病性禽流感(HPAI)、低致病性禽流感(LPAI)和无致病性禽流感。HPAI主要是由H5和H7亚型引起,不仅给国内外家禽养殖业造成巨大经济损失,而且也威胁到人类健康。LPAI主要以H9亚型为代表,一年四季均有发生,但多发于秋冬季节,尤其是秋冬、冬春交接等气候变化较大的时期。LPAI的危害虽然比HPAI小,但一旦感染,也可引起家禽生产性能下降、免疫抑制,甚至发病和死亡。近年来我国一直将HPAI纳入国家强制免疫计划,并根据不同地区的病毒变异和流行情况,及时调整疫苗毒株。2019年12月26日,农业农村部印发《2020年国家动物疫病强制免疫计划》,要求各地要加快推进“先打后补”的强制免疫政策。玉林市是广西家禽养殖大市。为了解规模禽场的AIV感染情况,对广西玉林市7个县(市、区)28个规模化鸡场和14个规模化鸭场进行了H5、H7、H9等亚型的AIV检测,以便为指导广西玉林市AI防控提供依据。
材料与方法
样本采集和处理
在广西玉林市7个县(市、区),按照配额抽样方式,每个县(市、区)随机选择年出栏量5万羽以上的4个规模化鸡场和2个规模化鸭场,共28个鸡场、14个鸭场作为研究群,按照玉林市2020年家禽规模场AI日常监测要求,每个场随机采集30份喉/泄殖腔棉拭子。将采集的喉/泄殖腔棉拭子放入含1 mL生理盐水的无菌EP管中,编号后冷藏,2 h内送至实验室。将样品漩涡混匀,10 000 r/min 离心5 min;取400 μL上清液装入1.5 mL无菌EP管中,进行RNA抽提或保存于-70 ℃冰箱备用。
方法
RNA抽提 将混匀离心后的棉拭子样品上清液,按TGuide S32磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒说明书进行RNA提取。
PCR检测 首先按照AIV通用型核酸检测(荧光PCR)试剂盒说明书要求,对样本抽提的RNA进行AIV检测。对检测为AIV阳性样本,按照H5/H7亚型核酸检测试剂盒(双重荧光PCR法)、H9亚型核酸检测试剂盒(荧光PCR法)说明书要求进行H5、H7和H9分型鉴定。
结果
规模化鸡场
对28个规模化鸡场的840份鸡喉/泄殖腔棉拭子样品进行AIV核酸检测。结果(表1)显示:在博白和福绵两地抽检的鸡场样品中,各有2个鸡场检测到阳性样品;检出通用型阳性样本59份,样品阳性率为7.02%,其中H9亚型18份,其他亚型41份,全为LPAIV。
规模化鸭场
对广西玉林市14个规模化鸭场的420份鸭喉/泄殖腔棉拭子样品进行AIV核酸检测,结果在博白、福绵和北流三地抽检的4个鸭场样品中,检测到通用型阳性样品74份,样品阳性率为17.62%;阳性样本全部为其他亚型的LPAIV,其中福绵区检出率最高,样品阳性率高达80.00%(表2)。
讨论
随着疫苗的普遍推广使用,HPAIV引发的疫情在我国呈现缓发态势。由于AIV亚型众多,各亚型和毒株间无交叉免疫保护,疫苗免疫并不能阻止所有AIV的侵入,因此我国各地经常有LPAIV在野鸟、家禽和环境中被检出的报道。对LPAIV调查研究显示:野鸟作为AIV的天然宿主、携带者及传播者,在与放养家禽密切接触下,可将野鸟源性的不同亚型毒株传递至放养禽并在其体内重排或交换,尤其是在水禽,各种亚型LPAIV基因重组的概率很高,从而加速了病毒的种间传播;家禽中的AIV可以通过基因重排,为感染人类的AIV提供基因,或直接突破种间屏障感染人。因此,在家禽养殖中,做好AI防控不但具有重要的经济价值,而且对人类公共卫生安全意义重大。
调查发现:广西玉林市未检出AIV阳性的规模化鸡场,主要采用笼养模式;未检出AIV阳性的鸭场,其周围适宜野鸟栖息的山林、树木较少,场地干湿分离,环境整洁卫生,水源充足。而4个AIV阳性鸡场、4个AIV阳性鸭场,其饲养方式均为林下或野外放养,环境卫生状况不佳,与野禽接触频率较高,其中2个鸭场阳性样品检出率分别为38.33%和80.00%,平均死淘率高达13.50%,远高于其他禽场。这一结果与国内其他地区报道的水禽是AIV储存库和传染源,一旦感染,AIV更容易在群体中传播扩散的结论相一致。
本次抽检未在玉林市规模化鸡场和鸭场检出H5和H7亚型HPAIV。这可能与H5和H7亚型HPAI的持续强制免疫有关,表明禽场的全群免疫可有效防控H5、H7亚型HPAIV侵袭。部分规模禽场受养殖模式或购苗影响,其禽群中会有不同程度的多亚型LPAIV混合感染。虽然H9亚型和其他亚型暂时没有引起鸡场、鸭场饲养的家禽大规模死亡,但有可能会增加禽群的死淘率。由于本次检测试剂有限,仅对H5、H7、H9亚型AIV进行了分型鉴定,对其他亚型AIV还有待进一步鉴定。
AIV在不同区域间的主要传播途径有候鸟传播和人为传播。禽类是AIV的天然宿主,比如家禽、宠物鸟类、观赏鸟类、捕获的野生鸟类等,其在人类的饲养和贸易活动过程中,极易造成AIV传播;此外,候鸟迁徙被认为是另一重要AIV传播途径。因此,良好、科学的饲养方式是预防AI的关键,应特别注意避免在候鸟迁徙过境、栖息滞留水域饲养家禽,避免与野鸟接触的家禽养殖模式有利于降低AIV的传播风险;规模化禽场要加强管理,严格执行疫苗免疫接种和环境消毒工作;规范活禽交易和运输,定期对活禽交易市场进行病毒监测和消毒。
自2020年起,HPAI的免疫政策将由政府采购疫苗,免费供养殖场免疫接种,逐步过渡到养殖场“先打后补”。在该政策的实施过程中,各级相关部门要加强该政策的宣贯,在疫苗采购、储存、免疫接种、免疫效果评估等方面做好技术指导,继续加强禽流感防控。
结论
在当前高致病性禽流感(H5+H7)三价灭活疫苗的强制免疫政策下,广西玉林市规模化禽场的HPAIV感染风险较小,未检出HPAIV病原,但仍有H9等亚型LPAIV的流行,存在LPAIV重组变异为HPAIV的风险,因此仍须继续加强AI的免疫与监测,做好综合防控。
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